健儿止泻颗粒质量标准的研究

摘要：目的建立健儿止泻颗粒的质量标准。方法采用比色法测定游离总氨基酸的含量。结果丝氨酸在0.32～0.60μg与吸收度呈良好的线性关系，平均回收率为99.8%，RSD为2.06%（n=6）。结论建立的方法简便、准确、可靠，可作为控制该药品的质量标准。

关键词：健儿止泻颗粒；游离总氨基酸；质量标准；比色法

健儿止泻颗粒是由芋头提取精制而成，具有固脾止泻、调整肠功能紊乱、促进小肠吸收的功能，并具有营养作用。用于婴幼儿迁延性慢性腹泻，小儿伤于乳食、寒暖失调、肠炎后久泻不愈，医|学教育网搜集整理肠道正常菌群失调及营养不良的患儿。根据文献记载和一些资料报道，芋头除含蛋白质，淀粉外，还含有游离氨基酸89.8mg/100g，水溶性多糖12.0%等成分。为了有效地控制健儿止泻颗粒的质量，本实验采用比色法对所含游离氨基酸进行了定量研究。

1材料

上海分析仪器厂752分光光度计、玻璃比色皿。试剂与试液均为分析纯，水为双蒸水。

2方法

2.1溶液的制备丝氨酸对照品（含量测定用），由中国药品生物制品检定所提供，批号为624-200104.

2.1.12%茚三酮溶液精密称取茚三酮2.00g溶于60ml热水中，冷至室温后，加水定容至100ml，滤过，取续滤液即得。

2.1.2pH8.24的磷酸盐缓冲液精密称取磷酸二氢钾0.4543g，加水溶解并定容至50ml，备用，精密称取磷酸氢二纳2.3880g，加水溶解并定容至100ml，备用，精密量取磷酸二氢钾溶液5.0ml，加入100ml量瓶中，加磷酸氢二纳溶液至刻度，摇匀，即得。

2.1.3供试品溶液的制备取供试品6g，研细，精密称定0.35g，置25ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2含量测定

2.2.1显色反应条件的选择：pH值的选择：首先按《中国药典》2000版二部附录项下分别配制pH值分别为3.6，4.5，6.0的醋酸盐缓冲液和pH值分别为6.5，7.0，8.24的磷酸盐缓冲液。然后精密量取供试品溶液5.0ml置25ml量瓶中，分别精密加入上述六种缓冲液1.0ml，再加入2%的茚三酮溶液2.0ml和水7.0ml，摇匀，置沸水浴中加热30min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，加水定容至刻度，滤过，取续滤液，以相应的溶剂为空白对照，在568nm处测得吸光度。结果显色反应的pH值为8.24测得的吸收度最高。2%茚三酮溶液用量的选择：精密量取供试品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入2%的茚三酮溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml，和pH值为8.24的磷酸盐缓冲液1.0ml，分别补水至15.0ml，摇匀，置沸水浴中加热30min，取出，在冷水浴中迅速冷却至室温，加水定容至刻度，滤过，取续滤液，以相应的溶剂为空白对照，在568nm处测定吸光度，结果2%茚三酮溶液的用量为2.0ml时测得的吸收度最高。显色反应加热温度的选择：精密量取供试品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入缓冲液1.0ml和2%的茚三酮溶液2.0ml以及水7.0ml，摇匀，分别置60℃水浴和沸水浴中加热20min，取出，在冷水浴中迅速冷却至室温，加水定容至刻度，医|学教育网搜集整理滤过，取续滤液以相应的溶剂为空白对照，在568nm处测定吸光度，结果温度为100℃的沸水浴测得的吸收值高。显色反应加热时间的选择：精密量取供试品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入2%的茚三酮溶液2.0ml和磷酸盐缓冲液1.0ml，水7.0ml，摇匀，分别置沸水浴中加热5，10，15，20，25，30，35，40min取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，加水定容至刻度，滤过，取续滤液，以相应加热时间的溶剂空白为对照，在568nm处测定吸光度，结果加热时间为30min测得的吸收值最高。供试品的含量测定方法：精密量取供试品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入pH8.24的磷酸盐缓冲液1.0ml和2%的茚三酮溶液2.0ml补水至15.0ml，摇匀，置沸水浴中加热30min，取出，置冷水浴中迅速冷却至室温，加水定容至刻度，滤过，取续滤液，以相应的溶剂为空白对照，在568nm处测定吸光度。

2.2.2标准曲线的制备：精密称取丝氨酸对照品9.97mg，加水溶解并定容至100ml，作为贮备液。精密吸取丝氨酸对照品贮备液50ml，加水稀释至100ml，作为对照品标准溶液。分别精密吸取对照品标准溶液7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，12.0ml，按照供试品含量测定方法项下操作，在568nm处测定吸光度。以丝氨酸对照品浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，进行线性回归，得回归方程，A＝51.3541C－0.5208，r＝0.9999.

2.3精密度：实验精密吸取批号为040301的同一份供试品溶液5.0ml，按照供试品含量测定方法项下操作，平行测定5份，RSD为0.81%，表明本方法精密度良好。

2.4稳定性：实验精密吸取批号为040301的供试品溶液5.0ml，按照供试品含量测定方法项下操作，测定吸光度，然后间隔30min重复测定1次，结果表明显色后的溶液在120min以内吸光度值稳定。

2.5重复性：实验取批号为040301的供试品，按照供试品含量测定方法项下操作，平行测定5份，结果供试品平均含量为：6.272mg/g，RSD为：1.99%，表明本方法重复性良好。

2.6加样回收：实验精密称定批号为040301的供试品粉末0.35g，平均含量为：6.272mg/g，分别加入浓度为0.828mg/ml的丝氨酸对照品溶液2.1，2.1，2.6，2.6，3.1，3.1ml，按照供试品含量测定方法项下操作，测定吸光度，平均回收率为：99.80%，RSD为：2.06%，表明本方法准确性良好。

2.7含量限度的确定：取10批供试品分别测定含量，平均含量为43.052mg/袋（每袋2g）。考虑到芋头产地不同等多种因素的影响，含量限度暂定为：每袋含总游离氨基酸以丝氨酸计不得少于20mg.

3结果与讨论

本实验中丝氨酸对照品与最大吸收波长的确定：芋头含的游离氨基酸中以丝氨酸含量最高。精密吸取丝氨酸对照品贮备液和供试品溶液各5.0ml，按照供试品含量测定方法项下操作，在分光光度计上扫描，得吸收光谱。结果表明供试品最大吸收波长568nm，与丝氨酸对照品完全一致，可以直接用比色法测定供试品中总游离氨基酸的含量。