超临界流体萃取法用于荜茇中胡椒碱定量测定研究

　　提要：建立超临界流体萃取（SFE）荜茇药材中的胡椒碱的方法。采用正交试验法优选SFE提取工艺，并用反相高效液相色谱法进行测定。在SFE中，确定萃取压力为38.5MPa，温度70℃，改性剂量0.4ml，静态萃取时间5min及动态萃取体积5ml.荜茇药材中胡椒碱的平均回收率为97.68%（RSD0.8%）。

　　关键词：超临界流体萃取；高效液相色谱法；荜茇；胡椒碱

超临界流体萃取是近代分离领域出现的高新技术，除了可以减少有机溶剂使用外，还具萃取效率和选择性高、省时、萃取溶媒便于挥发、提取物较为干净、环境污染小、操作条件易于改变等特点，是一种较为理想的萃取方法［1，2］。本实验建立了SFE-HPLC法测定荜茇中的胡椒碱，为荜茇及其制剂分析提供一种简单高效的预处理手段。

1仪器与试药

Waters600液相色谱仪，Waters996二极管阵列检测器（美国）；ISCO100注射泵，SFX-10超临界流体萃取仪（美国ISCO公司）；HA-202M电子天平（日本）；胡椒碱对照品（中国药品生物制品检定所提供）；荜茇药材购于安徽亳州药材市场，经第二军医大学药学院生药教研室鉴定；甲醇为色谱纯。

2方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱Shim-PackCLC-ODS（250mm×4.6mm），流动相为甲醇-水（77：23），流速1.0ml/min，室温，检测波长343nm.

2.2SFE萃取条件的选择

2.2.1改性剂的选择：超临界CO2流体的极性与正己烷相似，因此在萃取极性成分时，一般要加入少量极性溶剂，以改善萃取效果。我们考察了甲醇、氯仿和乙酸乙酯3种溶剂，以选择甲醇萃取效率为最高，因此我们选择了甲醇作为改性剂。

2.2.2萃取压力的选择：超临界流体具有很大的可压性，在一定温度下，压力增加，超临界流体的密度增加，溶质在流体中的溶解度增大，萃取效率提高。固定其他参数，改变压力从31.5～42.0MPa，每隔7MPa萃取1个点。结果表明，选择38.5MPa作萃取压力较好。

2.2.3温度的选择：恒压下，温度升高，流体密度下降，但溶解度是溶质挥发度的函数，提高温度可指数级地提高溶质的蒸气压，从而增加溶质的溶解度，提高萃取效率。改变温度从50～80℃，每隔10℃萃取1个点。结果表明，选择萃取温度为70℃较好。

2.2.4改性剂量的选择：加入一定量的极性改性剂可提高萃取量，但改剂用量过大会使萃取状态在一种非临界状态下进行，往往达不到理想的萃取效果。我们选择了0.2、0.3、0.4、0.5ml4个量进行考察。结果表明，用0.4ml甲醇改性剂在本实验中的萃取效果较好。

2.2.5静态萃取时间的选择：整个超临界流体萃取过程既包含转运，又存在扩散，保持一定的静态萃取时间，可提高萃取效率。我们选择了3、5、7min3个时间的萃取效率。结果表明，静态萃取时间5min较好。

2.2.6动态萃取体积的选择：动态萃取体积对萃取效率影响很大，固定其它4种萃取条件，改变萃取体积为3、5、7ml.结果表明，选择5ml为动态萃取体积较好。

2.2.7SFE最佳萃取条件：萃取压力38.5MPa，温度70℃，改性剂量0.4ml，静态萃取时间5min及动态萃取体积5ml.

2.3标准曲线绘制：精密称取胡椒碱对照品适量，用甲醇配制定容，使每1ml含胡椒碱191μg的甲醇溶液。精密吸取0.25、0.50、1.00、2.00、4.00ml置10ml容量瓶中，甲醇定容后依次进样，按上述色谱条件测定峰面积；以峰面积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：Y=3742618.04X+711184.58，γ=0.99997.

2.4精密度试验：取样品测定项下对照品溶液，重复进样5次，10μl/次，对照品峰面积积分值RSD为0.5592%.

2.5加样回收率试验：取已知含量的荜茇药材0.1g，加入对照品溶液适量，挥干，按样品方法萃取及测定，取5次测定的平均值计算回收率，结果为97.68%（RSD0.8%，n=5）。

2.6样品测定：取荜茇药材粉末0.1g，精密称定，以上述最佳萃取条件进行萃取，定容50ml，精取10μl直接进样，结果是2.920%.

3讨论

SFE是近年发展起来的新技术，操作简便，只需把样品装入萃取池，加入改性剂后可自动进行萃取，整个过程20min即可完成，而萃取液无需过滤即可直接进样分析，其萃取具有一定的选择性，提取的杂质较少，对环境几无污染，是传统的溶剂提取所不能比拟的，为中药有效成分的提取提供了一种有效的方法。本文考察了超临界流体萃取法与报道［3］的提取方法的提取效率，经t-检验，P值大于0.05，说明两种方法无显著性差异，但超临界流体萃取法时间短，效率高，后处理简单。